网站导航

技术文章

当前位置:主页 > 技术文章 > 链霉亲和素
链霉亲和素
时间:2020-08-28 点击次数:41

产品名称:链霉亲和素;cas:9013-20-1生物技术级,17u/mg

别名:链酶亲和素;链霉抗生物素蛋白;链亲和素

介绍:链亲和素(SA)是阿维丁链霉菌(Streptomyces avidinii)表达的一种小分子蛋白。本制品为127AA比较佳核心结构,每分子SA结合4个生物素分子,国际比活性12~15U/mg。SA与禽类亲和素(Avidin,AV)相比特异性更强,与生物素结合后半衰期长达6h,而AV半衰期仅为1h。由于SA不含糖基且等电点接近中性,因此SA在检测应用中具有比AV更低的非特异性背景。

用途:本制品已广泛应用于制备SA-偶联酶制剂(如SA-HRP,SA-AP等),SA-偶联荧光素(即荧光染料,如SA-FITC,SA-Cy2,SA-Cy3等)、SA-偶联磁珠等,进而参与酶联免疫吸附检测(ELISA)、免疫组化、亲和色谱填料、含StrepTagII标签(8-AA寡肽)的蛋白纯化、生物传感器、生物纳米微球、预靶向制药研究、生物芯片被料等生物技术领域。

优点:高亲和力,高偶联效率。

注意事项:

1.冻干粉溶解后应避免反复冻融,建议分装成小包装后分别冻存。

2.冻干粉中含20mMNa2CO3 pH9.5的缓冲体系,若用于包被,酶标可以直接使用。若用于胶体金,调节pH或透析后使用。溶解后立即使用效果比较好,不能4℃长期存放。

3.若用于ELISA包板,胶体金烘金,硝酸纤维素膜上用SA划线后需要烘干保存,包被液或缓冲液中需加入20%蔗糖作为活性保护剂。

【操作步骤简述】

一、微孔板包被

1、用碳酸钠缓冲溶液(pH 9.6)溶解冻干粉,将浓度稀释成3-10ug/ml(客户可设定梯度进行实验)

注意:由于SA等电点是7.4,包被不建议使用中性缓冲液

2、用移液器吸取100ul/孔,4℃过夜包被或者37℃包被2h;

3、洗涤:倒尽板孔中液体,加200ul洗涤液,静放三分钟,反复三次,最后将反应板倒置在吸水纸上,使孔中洗涤液流尽,扣干

4、后续进入封闭、洗涤、抗原抗体结合流程

若不立即进入下游实验,包被板需要进行烘干保存时。包被前,将包被液中加入20%蔗糖作为活性保护剂。

二、SA偶联磁珠

2.1 NHS 活化

1、充分混匀磁珠后,取100μl PangoBeads COOH 磁珠到1.5 ml 离心管中,置于磁性分离上,待固液分离后去除上清液;

2、取200μl MES溶液(25mM,pH 5.0)加入到离心管中,置于磁性分离上,待固液分离后去除上清液。重复该步骤1 次; **3、迅速加入新配制的50μl EDC 溶液和50μl NHS 溶液 (均为50mg/ml, 以上述MES 配制)到装有磁珠的离心管中,漩涡混匀使磁珠充分悬浮,室温下垂直混合30min; **4、反应结束后,加入100μl 上述 MES 溶液洗涤 2 次;(活化状态不宜长时间保存, 建议立即进行偶联)

2.2 蛋白偶联

1、将离心管置于磁性上,分离去除上清液,加入100μl蛋白溶液(25 mM MES,pH 5.0) 轻柔地混匀;(蛋白浓度在0.1-2.0mg/ml)

2、在室温下垂直混合反应2h,或在4℃条件下垂直混合过夜;

3、反应结束后将离心管置于磁分离架上,磁性分离去除上清液,加入1ml乙醇胺溶液 (3M,pH9.0)洗涤磁珠 2 次;

4、加1ml乙醇胺溶液(3M, pH 9.0)于离心管中,涡旋30s,将离心管置于垂直混合 仪中室温反应1-2h;

5、反应结束后,将离心管置于磁力架上,待固液分离后移除上清液,然后加入100μl 纯化水轻柔涡旋 30s,磁吸分离,重复该步骤 1 次;

6、加入适量的保存液(可根据需要来确定保存溶液的加入量,以调整偶联配体磁珠的加入适量的保存液(可根据需要来确定保存溶液的加入量,以调整偶联配体磁珠的浓度)保存于4°,如果固定的生物配体稳定,可以在保存溶液中加入0.02%(W/V)作为抑菌剂。

外观: 冻干粉

敏感性: 对热敏感,易吸潮

储存条件: -20℃

联系方式

邮件:jskangchina@163.com
地址:大发黄金版手机登录